紫外分光光度法（標準方法）

行業(yè)標準ISO 11285:2004（乳制品中6PG測定）和GB 5009.247-2016采用酶法：6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）催化6PG生成核酮糖-5-磷酸，同時NADP?還原為NADPH，檢測340nm吸光度。反應條件：25mM Tris-HCl（pH 8.0）、5mM MgCl?、0.5mM NADP?、0.5U/mL G6PDH。樣品需去蛋白處理（6%-三-氯-乙-酸-沉淀后中和），游離NADPH會嚴重干擾結果。該方法適用于食品、組織和細胞樣本，檢測下限0.5μM。

熒光法（高靈敏度應用）

當樣本量受限（如微量組織穿刺樣本）或6PG濃度低于0.1μM時，采用熒光法。反應原理相同，但激發(fā)波長340nm、發(fā)射波長460nm。靈敏度比紫外法高10倍，較低檢測限達到0.02μM。需注意緩沖液中使用無熒光的石英比色皿，并避免使用含還原性試劑（DTT、β-巰基乙醇）的裂解液，這些物質在340nm處有自發(fā)熒光。

液相色譜-質譜聯(lián)用（參考方法）

對于復雜基質（血漿、組織勻漿）中6PG與其他磷酸糖的區(qū)分，LC-MS/MS是普遍認為的參考方法。采用HILIC色譜柱（2.1×100mm，1.7μm），流動相為10mM甲酸銨（pH 4.0）和乙腈（梯度洗脫）。6PG的MRM離子對為259→97（負離子模式）。該方法精密度（CV<3%）優(yōu)于酶法，但設備成本高、前處理需固相萃取凈化。行業(yè)標準中作為仲裁法使用。

樣本采集與保存規(guī)范

全血樣本中6PG在室溫下每小時代謝降解約8%。采集后應立即加入預冷的高氯酸（終濃度0.5M）沉淀蛋白，中和后-80℃保存。組織樣本離體30秒內投入液氮，研磨時保持冷凍狀態(tài)。避免反復凍融，6PG在-20℃可穩(wěn)定2周，-80℃穩(wěn)定6個月。血清或血漿樣本必須使用肝素抗凝，EDTA會螯合反應所需的Mg2?。

方法適用性聲明

食品行業(yè)優(yōu)先采用紫外分光光度法（成本低、通量高）；臨床研究推薦熒光法（靈敏度匹配生理濃度）；代謝組學必須使用LC-MS/MS（排除6-磷酸葡萄糖、果糖-6-磷酸等同分異構體干擾）。實驗室需定期參與能力驗證計劃，如中國食品藥品檢定研究院組織的磷酸糖類測定比對。